Biologie cellulaire

Comptage et mesure de la viabilité des cellules pour des résultats cohérents

Dans la recherche en biologie cellulaire, le contrôle des procédures de numération cellulaire au stade le plus précoce favorise l’obtention de résultats reproductibles. L’utilisation d’un compteur de cellules automatique est recommandée pour garantir l’utilisation d’un nombre égal de cellules dans l’analyse en aval et pour déterminer la concentration de cellules de manière exacte et précise.

Solutions

Que vous deviez réaliser le comptage et la mesure de la viabilité cellulaires, ou une analyse approfondie des cellules présentant une reproductibilité élevée au marquage par fluorescence, nous avons la solution adaptée à vos besoins en matière de recherche en biologie cellulaire. Nos instruments sont des cytomètres imageurs de fluorescence automatiques conçus pour être faciles à utiliser, précis et exacts.

La réalisation de recherches de grande qualité dépend de la reproductibilité et de la cohérence de vos données. Les instruments NucleoCounter® vous offrent un large éventail de fonctions: un comptage et une mesure de la viabilité cellulaires précis et une analyse approfondie d’échantillons de cellules, le tout en réduisant au minimum l’interférence de l’utilisateur.

Les tests prêts à l’emploi comprennent cinq essais pour l’étude de l’apoptose, une analyse du cycle cellulaire et un test de transfection par GFP. Une plate-forme pour les tests définissables par l’utilisateur est également disponible. Nos instruments sont conçus pour des laboratoires de recherche et développement dédiés à la biologie cellulaire.

Détermination du nombre de cellules et de leur viabilité sans biais

La numération manuelle des cellules à l’aide d’un hémocytomètre et d’exclusion au bleu trypan est chronophage et en grande partie tributaire de la perception de l’utilisateur et de ses compétences en matière de pipetage.

Pour déterminer le nombre et la viabilité des cellules à l’aide des instruments NucleoCounter® NC-202™ et NC-3000™, il vous suffit de placer la suspension cellulaire dans la Via2-Cassette™ ou la Via1-Cassette™, respectivement. Les cellules sont automatiquement colorées par l’acridine orange et le DAPI, les deux fluorophores à l’intérieur de la cassette, qui colorent respectivement la totalité des cellules et les cellules mortes. Le volume de la chambre de numération est pré-calibré, ce qui vous garantit une précision et une reproductibilité élevées.

Détermination très rapide de la viabilité et du nombre de cellules

La NC-Slide A8™ à chambres multiples permet d’obtenir rapidement des mesures de viabilité et comptage cellulaires sur des populations de cellules d’insectes et de mammifères, puisque l’appareil peut analyser jusqu’à huit échantillons en moins de trois minutes. Il vous suffit de mélanger la suspension cellulaire avec de l’acridine orange et du DAPI pour colorer respectivement la totalité des cellules et les cellules mortes. Placez ensuite l’échantillon dans les chambres de la A8-slide™ et insérez la lame dans le NucleoCounter® NC-3000™.

Nous proposons des protocoles de numération optimisés pour les cellules agrégées, les cellules se développant sur des micro-supports et à l’intérieur de sphéroïdes. En savoir plus sur la mesure de la viabilité et le comptage de cellules en utilisant le NC-Slide A8™ pour analyser des cellules de mammifères.

Visualisation et analyse supérieures des données

Le logiciel NucleoView™ est l’interface utilisateur du NucleoCounter® NC-200™ et NC-3000™. Il gère l’acquisition et la présentation des données, ainsi que l’analyse des images. NucleoView™ comprend une variété de fonctionnalités de traitement des données parfaitement adaptées aux environnements réglementés.

Le logiciel vous permet d’inspecter visuellement l’image de fluorescence et vous donne la possibilité de vérifier la numération. Vous avez la possibilité de sélectionner des populations d’événements spécifiques dans le diagramme de dispersion, les examiner et déterminer si vous pouvez les inclure ou pas dans les résultats finaux de numération. Le fenêtrage peut être ajusté et vous pouvez enregistrer ce protocole adapté pour vos futures mesures.

Comptage des cellules agrégées

Le NucleoCounter® NC-202™ (et NC-200™) permet de réaliser un large éventail d’essais spécialisées, ce qui en fait le compteur de cellules parfait. Les cultures en sphères ou les cellules fortement agrégées font du comptage cellulaire un vrai défi, mais grâce à leur technique d’analyse spécialisée, ces instruments sont capables d’effectuer la numération des échantillons de culture cellulaire les plus agrégés.

Découvrez comment obtenir un comptage précis des cellules agrégées.

Tests d'apoptose standardisés

Pour effectuer des recherches approfondies sur la mort cellulaire, il est essentiel d’étudier les mécanismes de l’apoptose. Grâce au NucleoCounter® NC-3000™ et à sa série de cinq tests prêts à l’emploi, comprenant l’analyse par coloration à l’annexine V, l’analyse du potentiel de membrane mitochondriale à l’aide du JC-1, de la signalisation par les caspases, de la fragmentation de l’ADN et le test de vitalité unique en une minute, vous pouvez procéder à une étude complète des mécanismes de mort cellulaire.

TEST D’APOPTOSE CHANGEMENTS PHYSIOLOGIQUES DÉTECTÉS STADE
Analyse du potentiel mitochondrial (JC-1) Effondrement du potentiel de la membrane mitochondriale Précoce
Analyse par coloration à l’annexine V Effondrement de l’asymétrie lipidique de la membrane plasmique Précoce-moyen
Analyse des caspases L’activation des caspases signale les événements apoptotiques en aval Précoce-moyen
Mesure de vitalité (VB48 ™) Diminution des niveaux cellulaires de thiols réduits, par exemple le GSH Tardif
Analyse de la fragmentation de l’ADN Décomposition et fragmentation de l’ADN Tardif

 

Couvrant les stades précoces à tardifs de l’apoptose, ces analyses vous aident à réaliser des études approfondies de la progression de l’apoptose dans les cellules de mammifères. Avec NucleoView™, vous pouvez effectuer aisément une analyse avancée des données. La plateforme présente des liens entre des images, des histogrammes et des nuages de points, ce qui vous donne accès à une analyse de données détaillée et précise qui identifie les pourcentages de cellules apoptotiques, nécrotiques et vivantes.

Surveillance de la viabilité et de l'efficacité de la transfection de la GFP

Lors de la transfection de cellules avec des gènes d’intérêt, une façon de déterminer l’efficacité de la transfection est de co-exprimer une protéine fluorescente, telle que la protéine fluorescente verte (GFP) avec le même promoteur et de déterminer la quantité de GFP.

Le NucleoCounter® NC-3000™ offre une technique d’analyse rapide et facile pour l’étude de l’efficacité de transfection de la GFP et de ses niveaux d’expression. En colorant les cellules avec du Hoechst 33342 et de l’iodure de propidium (IP), vous pouvez définir la population cellulaire totale et la population de cellules mortes tout en mesurant la population qui exprime la GFP.

Coloration cellulaire affichée dans le logiciel NucleoView™ à l'aide du test d'efficacité de transfection de la GFP avec le NucleoCounter® NC-3000™

A – Les cellules sont localisées en utilisant le colorant Hoechst 33342 (bleu), ce qui permet de facilement déterminer le pourcentage de cellules exprimant la GFP (vertes). Les cellules non viables sont colorées avec de l’iodure de propidium (IP ; rouge).
B – Toutes les cellules colorées avec du Hoechst 33342 (bleu) sont identifiées.
C – Les cellules exprimant la GFP sont identifiées en vert et les cellules non viables en rouge par coloration avec de l’IP.

Le couplage facile entre l’image obtenue et les diagrammes de dispersion ou les histogrammes vous permettent de déterminer les paramètres de fenêtrage précis utilisés pour étudier la répartition de la coloration pour des populations de cellules spécifiques. Le NucleoCounter® NC-3000™ offre une plate-forme tout-en-un pour évaluer l’efficacité d’expression de la GFP.

 

A – Grâce à la fonction de superposition d’images du logiciel NucleoView™, les cellules non viables colorées à l’IP peuvent être facilement localisées

B – Les cellules transfectées par la GFP peuvent être identifiées immédiatement

Analyse rapide du cycle cellulaire

L’étude de l’impact d’un traitement sur la division cellulaire est l’un des outils les plus puissants de la biologie cellulaire. Le NucleoCounter® et le NC-3000™ fournissent une analyse rapide et facile du cycle cellulaire en moins de cinq minutes.

Après l’ajout d’un tampon de lyse, tous les noyaux cellulaires sont colorés et l’échantillon est analysé à l’aide du NC-3000 ™. Un profil du cycle cellulaire s’affiche dans le Plot Manager fourni dans le logiciel NucleoView™. Les événements de la sous-phase G1, de la phase G0/G1, de la phase S et de la phase G2/M sont identifiés.

Grâce au progiciel FlexiCyte™, le NucleoCounter® NC-3000™ peut même être utilisé pour réaliser une étude approfondie de la prolifération cellulaire à l’aide de l’incorporation de BrdU et de l’EdU, détectés par des anticorps marqués par fluorescence.

A – Les différentes phases du cycle cellulaire peuvent être distinguées en fonction de la teneur en ADN à l’aide d’une coloration fluorescente de l’ADN.

B – Analyse du cycle cellulaire en deux étapes des cellules Jurkat non traitées et traitées avec de la camptothécine (CPT). Les histogrammes affichent l’intensité du colorant d’ADN DAPI et peuvent être utilisés pour définir les événements du cycle cellulaire lors de la sous-phase G1, de la phase G0/G1, de la phase S et de la phase G2/M. Après le traitement avec de la CPT, le cycle cellulaire est arrêté à la phase G2/M.

Analyse cellulaire approfondie

Le module FlexiCyte™ disponible pour le NucleoCounter® NC-3000™ permet aux utilisateurs d’effectuer une analyse cellulaire approfondie et détaillée de leur choix dans des cellules de mammifères et d’insectes. La combinaison de LED, allant des UV au rouge lointain, associée à un ensemble de filtres d’émission soigneusement sélectionnés, vous permet de détecter une large gamme d’anticorps et de protéines fluorescents.

La fonction « Assistant d’adaptation de protocole » guide l’utilisateur dans le processus de sélection des paramètres optimaux. Après l’acquisition des images, les données cellulaires sont présentées dans le gestionnaire de tracés à côté de l’image fluorescente sous forme de diagrammes de dispersion, d’histogrammes ou les deux. En liant des images à des graphiques, vous disposez de tout ce dont vous avez besoin pour effectuer des analyses de données détaillées.

Combinaisons de LED FlexiCyte™ et de filtres d'émission dans le NucleoCounter® NC-3000™

Le progiciel FlexiCyte™ permet une analyse détaillée des biomarqueurs d’une large gamme d’anticorps fluorescents et de protéines.