Amplifier la production de virus sans compromettre la fiabilité du processus

Chez CEVEC Pharmaceuticals

Introduction

La croissance rapide du nombre de produits de thérapie génique a conduit à une augmentation parallèle du besoin de production industrielle de vecteurs viraux appropriés. Cependant, les systèmes de production actuels manquent souvent d’évolutivité et de fiabilité.

Les lignées cellulaires CAP-GT de CEVEC Pharmaceuticals offrent une nouvelle plate-forme pour la production industrielle de vecteurs viraux. Leurs lignées cellulaires CAP-GT sont dûment étayées par une documentation complète et conformes aux exigences réglementaires. En se multipliant dans une culture en suspension sans sérum à des densités élevées, les cellules fournissent une plate-forme de production de vecteurs entièrement évolutive qui garantit la reproductibilité de la transfection et offre un moyen de production de vecteurs viraux d’une grande efficacité.

La détection précise de l’efficacité de la transfection de la GFP constitue une étape cruciale de ce processus, mais la fiabilité des méthodes actuellement disponibles est souvent insuffisante alors même qu’elles nécessitent beaucoup de temps et de main-d’œuvre. Pour ces raisons, l’efficacité de la transfection de la GFP au CEVEC est systématiquement déterminée à l’aide du  NucleoCounter® NC-3000™, un cytomètre en image sophistiqué, qui garantit la reproductibilité et l’analyse rapide de plusieurs échantillons.

Un processus de travail optimisé augmente les titres lentiviraux

Pour optimiser les titres des vecteurs lentiviraux dans les cellules CAP-GT, le CEVEC a eu recours à la conception d’une approche expérimentale afin de déterminer les meilleures densité cellulaire et quantités d’ADN et de réactif de transfection. Ils ont également testé l’ajout de suppléments lipidiques et analysé leur influence sur la production virale. Dans ces conditions optimisées, ils ont obtenu une multiplication par dix de la production de vecteurs lentiviraux. Ce système de culture à haute densité est évolutif et peut être adapté à n’importe quel format de bioréacteur actuellement disponible.

Efficacité de la transfection de la GFP avec le NucleoCounter® NC-3000™ - Rapide et facile

La manipulation d’un grand nombre d’échantillons requiert une quantification fiable et rapide du nombre de cellules et de l’expression de la GFP. Grâce au NucleoCounter® NC-3000™ de paillasse, la fluorescence GFP peut facilement être déterminée. En quelques minutes, le NC-3000™ fournit à la fois le taux de transfection et celui de mort cellulaire. Tous les signaux sont quantifiés de manière automatique et les résultats sont affichés dans des tableaux, des histogrammes et des nuages de points.

En utilisant le NucleoCounter® NC-3000™, vous obtenez rapidement des résultats détaillés et reproductibles. De plus, il vous permet d’effectuer des inspections visuelles détaillées de vos cellules.

Voir le jeu complet de données dans l’affiche au format PDF ci-dessous.

Conclusion

Les conditions de production lentivirale basée sur la plate-forme CAP-GT ont été optimisées par la conception d’une approche expérimentale pour déterminer la densité cellulaire et la quantité d’ADN et de polyéthyléneimine (PEI). La supplémentation en lipides a permis de considérablement augmenter la production de particules infectieuses LV. Un protocole évolutif sans étape d’échange de support a été développé en exploitant le support CD-FortiCHO. Ce processus d’optimisation a abouti à une énorme amélioration des titres, même par rapport à ceux observés en ayant recours à des cellules adhérentes HEK293T. Grâce au NucleoCounter® NC-3000™, il a été possible d’obtenir une quantification rapide et fiable du nombre de cellules et de l’expression de la GFP pour une grande quantité d’échantillons.

Auteurs

Martina Graßl, Kerstin Hein, Simon Fradin, Helmut Kewes et Nicole Faust.