Thérapie cellulaire avec cellules CAR-T et CAR-NK

Fiabilité dans la détermination du nombre et de la viabilité des cellules à des fins de développement et de fabrication

L’une des approches les plus prometteuses en matière de thérapie cellulaire est l’immunothérapie par lymphocytes T ou par lymphocytes NK (cellules tueuses naturelles) modifiés par ingénierie et exprimant des récepteurs d’antigènes chimériques (CAR). À toutes les étapes de la fabrication des CAR-T et CAR-NK, la viabilité et le comptage des cellules doivent être déterminés avec précision.

La numération des CAR-T et CAR-NK dans le cadre de la recherche et de la fabrication en thérapie cellulaire est un défi. La fabrication dans une salle blanche et, parfois, l’exécution du même protocole de traitement pour tout produit thérapeutique sur différents sites imposent des méthodes de comptage cellulaire strictes car il est crucial que ce dernier demeure toujours identique.

Contrairement aux bioprocédés traditionnels qui reposent sur l’amplification des lignées cellulaires dans les bioréacteurs, les thérapies cellulaires autologues sont élaborées à partir de tissus prélevés chez des donneurs individuels par un processus de fabrication qui comprend plusieurs étapes. Ainsi, une diversité substantielle des échantillons est observée lors de la fabrication des thérapies cellulaires.

Le compteur de cellules automatisé NucleoCounter® NC-202™ détermine le nombre de cellules ainsi que leur viabilité dans des conditions difficiles souvent rencontrées dans le cadre des thérapies cellulaires, telles qu’en présence de globules rouges, de billes magnétiques ou d’agrégats de cellules (cultures d’agrégats). C’est un instrument qui vous offre une très faible variabilité inter-individuelle et inter-instruments. Il éliminera pratiquement tous les temps d’arrêt, en permettant des processus de fabrication fiables. En vertu de son logiciel compatible GMP, NucleoCounter® est idéal pour la production de thérapies cellulaires.

Immunothérapies adoptives utilisant des lymphocytes CAR-T et CAR-NK modifiés par ingénierie cellulaire

L’une des approches les plus encourageantes en matière de thérapie cellulaire est l’immunothérapie adoptive utilisant des lymphocytes T cytotoxiques autologues ou les cellules tueuses naturelles (NK). Ces médicaments de thérapie innovante (ATMP) sont au centre de l’attention des entreprises biopharmaceutiques du monde entier car ils promettent des approches médicales personnalisées et de meilleurs résultats pour les patients.

Les lymphocytes T peuvent être modifiés pour exprimer soit des récepteurs de cellules T (TCR) soit des récepteurs antigéniques chimériques (CAR) pour améliorer leur spécificité et toxicité vis-à-vis des cellules cancéreuses.

Les nouvelles thérapies cellulaires CAR-NK ciblent principalement les cancers et peuvent avoir un grand potentiel dans les thérapies allogéniques en raison de leur immunophénotypage, très peu impliqué dans la réaction du greffon contre l’hôte 1.

 

La création de cellules T ou NK modifiées consiste d’abord à isoler les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) du patient, puis à enrichir des sous-ensembles de cellules d’intérêt et à les modifier génétiquement par transfection virale. Ensuite, elles sont amplifiées à grande échelle et administrées au patient par injection. Outre les échantillons de PBMC, les lymphocytes T et NK qui seront génétiquement modifiés pour exprimer le CAR, peuvent être issus de la leucaphérèse, de la moelle osseuse (MO), du sang de cordon ombilical (UCB) et de cellules souches pluripotentes induites (CSPi).

Au moyen du NucleoCounter® NC-202™, vous pouvez suivre étape par étape le processus de comptage cellulaire lors de la production des cellules CAR-T et CAR-NK modifiées par ingénierie cellulaire. L’instrument facilite le suivi de la purification, de l’expansion et de la formulation des CAR-T tout en garantissant des résultats précis et fiables.

Le compteur de cellules automatisé NucleoCounter® NC-202™ détermine le nombre de cellules ainsi que leur viabilité dans des conditions difficiles souvent rencontrées dans le cadre des thérapies cellulaires, telles qu’en présence de globules rouges, de billes magnétiques ou d’agrégats de cellules (cultures d’agrégats). C’est un instrument qui vous offre une très faible variabilité inter-individuelle et inter-instruments. Il éliminera pratiquement tous les temps d’arrêt, en permettant des processus de fabrication fiables. En vertu de son logiciel compatible GMP, NucleoCounter® est idéal pour la production de thérapies cellulaires.

Les compteurs de cellules automatisés NucleoCounter® permettent de déterminer de manière fiable et précise le nombre de cellules et la viabilité des lymphocytes T durant le développement et la production des cellules CAR-T et CAR-NK.

Combinée à ce compteur de cellules, l’extraordinaire Via2-Cassette™ réalise l’échantillonnage, la coloration et le comptage des cellules en une seule étape. Les colorants, orange acridine (AO) et DAPI, préchargés dans la Via2-Cassette™, permettent une détection précise des lymphocytes T, même en présence d’érythrocytes, de billes ou de réactifs formulés. Le système NucleoCounter® est donc l’instrument le plus fiable pour la production de l’immunothérapie adoptive par cellules CAR-T.

Surveillez le processus étape par étape

La Via2-Cassette™ est préchargée avec de l’AO et du DAPI, et cela évite tout problème générant les inexactitudes significatives détectées lors du comptage de cellules en champ lumineux. Le nombre de cellules total et de cellules mortes est déterminé au moyen de la Via2-Cassette™. L’analyse ignore les fragments cellulaires et les artéfacts comme les micelles ainsi que les cellules non nucléées, telles que les plaquettes et les érythrocytes, donnant ainsi un résultat très précis.

Pour l’isolement des lymphocytes T et NK, des billes magnétiques peuvent être utilisées. Avec le NucleoCounter® NC-202™, les billes n’auront aucune influence sur le comptage cellulaire qui demeurera précis. En conclusion, le NC-202™ peut être utilisé à chaque étape du processus de fabrication cellulaire.

Gestion et présentation des données relatives aux fonctionnalités supérieures

Le logiciel NC-View™ permet aux utilisateurs de visualiser aisément les données d’image de fluorescence grâce à une analyse visuelle plus approfondie de ces données.

Dans la visionneuse, vous pouvez activer et désactiver des canaux LED individuels pour inspecter les cellules : l’ensemble de celles-ci est détecté dans le canal vert, les cellules mortes sont détectées dans le canal bleu et les deux peuvent être observées en vue fusionnée. Vous pouvez visualiser encore plus clairement les cellules vivantes et mortes entourées respectivement de jaune et de rouge pour une vérification simplifiée.

Le NucleoCounter® NC-202™ est pré-calibré et GMP compatible

Le succès des essais cliniques sur les lymphocytes T modifiés et CAR-NK dépend du développement de la fabrication BPF des lymphocytes T modifiés et CAR-NK de qualité clinique afin de commercialiser cette thérapie en toute sécurité. le NucleoCounter® NC-202™ peut être intégré très facilement dans les laboratoires conformes aux normes GMP et FDA 21 CFR Part 11.

Les protocoles intégrés de validation et de qualification IQ/OQ/PQ assurent le contrôle du fonctionnement. Les rapports PDF standardisés, le contrôle utilisateur et les pistes d’audit offrent une documentation adéquate relative à l’utilisation. Grâce à la Via2-Cassette™, les variabilités découlant généralement du pipetage, de la coloration et du comptage sont réduites au minimum, ce qui assure une fiabilité du comptage et un résultat très précis

Références

  1. W Glienke, R Esser, C Priesner et al.: Advantages and applications of CAR-expressing natural killer cells. Front Pharmacol2015; 6: 21. 

Vidéos

NC-202™ Product Video