Étude de l’efficacité de transfection de la GFP

Validez l’efficacité de la transfection à l'aide du NucleoCounter® NC-3000™

  • Protocole fixe – aucun paramétrage requis
  • Entièrement automatisé – il suffit de charger l’échantillon et d’appuyer sur « run »
  • Spécificité élevée – évalue la transfection au niveau de la cellule individuelle
  • Visualisez les résultats sous forme d’images, de diagrammes de dispersion et d’histogrammes de la GFP
  • Obtenez des résultats précis et reproductibles

Présentation de l’étude d’efficacité de transfection de la GFP

L’introduction et l’expression de gènes étrangers dans les cellules eucaryotes est une technique largement utilisée pour étudier la régulation et la fonction des gènes. Il est important que les scientifiques pratiquant ces techniques sachent quelle proportion de cellules ont absorbé ce nouveau gène, une mesure appelée « efficacité de transfection. » C’est une mesure essentielle, car elle affecte fortement l’optimisation des processus et l’interprétation des résultats en aval.

Une méthode simple pour déterminer l’efficacité de la transfection consiste à utiliser la protéine fluorescente verte (GFP) utilisée comme gène rapporteur. Au moyen d’un promoteur approprié, la GFP peut être exprimée dans les cellules seule ou liée à la protéine d’intérêt en tant que protéine de fusion. Grâce à un système à gène rapporteur à la GFP, l’efficacité de transfection peut être facilement déterminée en tant que pourcentage de cellules exprimant la GFP dans la population cellulaire totale.

Le NucleoCounter® NC-3000™ est équipé d’un test convivial d’efficacité de transfection avec la GFP et utilise un échantillon à très faible volume. La préparation des échantillons pour le test d’efficacité de la transfection de la GFP à l’aide du NucleoCounter® NC-3000™ est rapide et facile. Ajoutez simplement les solutions 15 et 16 à votre échantillon, incubez à 37° C et chargez votre échantillon sur une NC-Slide A2™ ; pour un débit élevé, utilisez une NC-Slide A8™. En quelques minutes, vous pourrez afficher les images et données correspondantes, présentées sous forme de diagrammes de dispersion et d’histogrammes pour un maximum de huit échantillons.

Principe du test

Principe du test d’efficacité de transfection de la GFP prêt à l’emploi à l’aide du NucleoCounter® NC-3000™ :

  • Les cellules sont localisées au Hoechst 33342 (bleu), ce qui permet de déterminer facilement le pourcentage de cellules exprimant la GFP (vertes). Les cellules non-viables sont colorées à l’iodure de propidium (IP, rouges)
  • Dans le logiciel NucleoView™ fourni, toutes les cellules colorées au Hoechst 33342 apparaissent en bleu

Résultats

Le diagramme de dispersion correspondant quantifie les images acquises à l’aide du test d’efficacité de transfection de la GFP du cytomètre en images avancé NucleoCounter® NC-3000™.

Au moyen du logiciel NucleoView™, vous pouvez identifier et sélectionner des populations et/ou des cellules individuelles dans les données d’image de fluorescence et savoir où elles sont situées au niveau des nuages de points. Cela permet de tracer de manière complète les intensités de la GFP et de l’IP pour chaque cellule, d’identifier précisément les cellules à analyser et confirmer, par l’examen visuel, leur état de coloration. Vous pouvez donc définir des seuils distincts entre les cellules GFP + et GFP- et différencier les cellules vivantes des cellules mortes en toute confiance.

Ce système à deux niveaux de génération et confirmation des données un avantage précieux associé à l’utilisation du cytomètre en images avancé NucleoCounter® NC-3000™. Avec le logiciel NucleoView™, vous pouvez créer et enregistrer vos valeurs seuils en tant que modèle et protocole à appliquer à de futures analyses en réduisant ainsi au maximum les délais d’exécution.